今天若米知识就给我们广大朋友来聊聊无菌方法学验证,以下关于观点希望能帮助到您找到想要的答案。
医疗机具无菌检查方法
最佳答案医疗器械无菌检查操作规程
1 目的
通过无菌检验，确保灭菌后产品能够达到无菌的要求。
2 适用范围
适用于灭菌后医疗器械产品的无菌检验。
3 检验依据
《中国药典》（2010年版）
GB14233.2-2005 医用输液、输血、注射器具检验方法第二部分：生物试验方法
4 仪器、设备
百级层流超净工作台、电热干燥箱、恒温培养箱、霉菌培养箱、压力蒸汽灭菌器、集菌仪（器）、电子天平、PH计、冰箱、恒温水浴锅、酒精灯、三角烧瓶，接种环、无菌棉签、镊子，试管架，大试管若干等。
5 无菌检验室的环境要求
5.1 无菌检验应在环境洁净度10000级下的局部百级的单向流空气区域内进行。
5.2 缓冲区与外界环境、无菌检验室与缓冲区之间空气应保持正压，阳性对照室与缓冲区之间空气应保持负压。无菌检验室与室外大气之间静压差应大于10Pa。无菌检验室的室温应保持18～26℃，相对湿度：45～65%。
5.3 无菌检验室的单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的监测。每年至少检测一次。
5.4 无菌检验过程中应同时检查超净工作台单向流空气中的菌落数：每次操作时在层流空气所及台面的左中右置3个营养琼脂平板，暴露30min，于30～35℃培养48小时，菌落数平均应不超过1CFU/平板。
6 无菌检验前的准备
6.1 器具灭菌、消毒
6.1.1 灭菌：试验过程中与供试品接触的所有器具必须采用可靠方法灭菌。可经电热干燥箱160℃干烤2小时，或置压力蒸汽灭菌器内121℃蒸汽灭菌30分钟后使用（根据灭菌效果验证决定灭菌参数）。所有的灭菌物品不应超过2周即用毕，否则应重新灭菌。
6.1.2 消毒：凡检验中使用的器材无法灭菌处理的，使用前必须经消毒处理。如无菌检验室的试管架、电子天平、工作台面、工作人员的手、橡胶吸头等。可采用消毒剂浸泡或擦拭。消毒剂应每月更换，以防止产生耐药菌株。
6.1.3 标识：器具的灭菌、消毒后必须做好标识，标明灭菌、消毒时间和使用有效期。
6.2 人员、物料进入无菌检验室
6.2.1 开启紫外线灯或臭氧发生器进行空间灭菌处理，消毒时间不得少于30min
中国药典无菌检查法的方法验证试验
最佳答案当建立产品的无菌检查法时，应进行方法的验证，以证明所采用的方法适合于该产品的无菌检查。若该产品的组分或原检验条件发生改变时，检查方法应重新验证。
验证时，按“供试品的无菌检查”的规定及下列要求进行操作。对每一试验菌应逐一进行验证。 取每种培养基规定接种的供试品总量按薄膜过滤法过滤，冲洗，在最后一次的冲洗液中加入小于100 cfu的试验菌，过滤。取出滤膜接种至硫乙醇酸盐流体培养基或改良马丁培养基中，或将培养基加至滤筒内。另取一装有同体积培养基的容器，加入等量试验菌，作为对照。置规定温度培养3～5天，各试验菌同法操作。
（注：《中国药典》2010版三部附录ⅩⅡA无菌检查法为“细菌置30℃～35℃、真菌置20～25℃培养3～5天，逐日观察各滤筒内实验菌的生长情况。”） 取符合直接接种法培养基用量要求的硫乙醇酸盐流体培养基8管，分别接入小于100 cfu的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各2管，取符合直接接种法培养基用量要求的改良马丁培养基4管，分别接入小于100 cfu的白色念珠菌、黑曲霉各2管。其中1管接入每支培养基规定量的供试品量，另1管作为对照，按置规定的温度培养3～5天。
（注：《中国药典》2010版三部附录ⅩⅡA无菌检查法为“细菌置30℃～35℃、真菌置20～25℃培养3～5天，逐日观察各滤筒内实验菌的生长情况。”） 与对照管比较，如含供试品各容器中的试验菌均生长良好，则说明供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计，照此检查方法和检查条件进行供试品的无菌检查。如含供试品的任一容器中的试验菌生长微弱、缓慢或不生长，则说明供试品的该检验量在该检验条件下有抑菌作用，可采用增加冲洗量、增加培养基的用量、使用中和剂或灭活剂、更换滤膜品种等方法，消除供试品的抑菌作用，并重新进行方法验证试验。
（注：《中国药典》2010版三部附录ⅩⅡA无菌检查法为“结果判定”。）
方法验证试验也可与供试品的无菌检查同时进行。
青霉素钠无菌检查的方法验证
最佳答案目的 建立健全青霉素钠无菌检查方法，保证检验结果的准确性和可靠性。
方法 采用薄膜过滤法进行。
1.培养基及其制备方法
培养基应适合需气菌、厌气菌或真菌的生长，可按以下处方制备，亦可使用按该处 方生产的符合规定的脱水培养基。以下培养基制备时，均以115℃灭菌30分钟。 1.需气菌、厌气菌培养基(硫乙醇酸盐流体培养基) 酪胨（胰酶水解） 15g 氯化钠 2.5g 葡萄糖 5g 新配制的0.1%刃天青溶液 1.0ml L－胱氨酸 0.5g (或新配制的0.2%亚甲蓝溶液0.5ml) 硫乙醇酸钠 0.5g 琼脂 0.5～0.7g (或硫乙醇酸0.3ml) 水 1000ml 酵母浸出粉 5g 除葡萄糖和刃天青溶液外，取上述成分加入水内，微温溶解后，调节pH为弱碱性， 煮沸，滤清，加入葡萄糖和刃天青溶液，摇匀，调节pH值使灭菌后为7.1±0.2，分装， 灭菌。 在供试品接种前, 培养基指示剂氧化层的颜色不得超过培养基深度约1/5，否则,须 经水浴煮沸加热, 只限加热一次。
2.选择性培养基
(1) 对氨基苯甲酸培养基（用于磺胺类药物的无菌检查） 照上述需气菌、厌气菌 培养基及真菌培养基的处方及制法，各加对氨基苯甲酸0.125g，溶解后，摇匀,分装,灭 菌。 (2) 聚山梨酯80培养基（用于油剂药品的无菌检查） 照上述需气菌、厌气菌培养基 及真菌培养基的处方及制法，各加10ml聚山梨酯80，摇匀，分装，灭菌。
3.操作
按该药品项下规定的方法处理后, 加入0.9%无菌氯化钠溶液或其他适宜的溶剂至少100ml中, 混合后，通过装有孔径不大于0.45μm的薄膜过滤器，然后用0.9%无菌氯化钠溶液或其他适宜的溶液冲洗滤膜至阳性对照菌正常生长。将需气菌、厌气菌培养基，真菌培养基用阳性对照管用培养基分别加至薄膜过滤器内（封闭式过滤器），或取出滤膜分成3等份,分别加入上述二种培养基中，按规定温度和时间培养。阳性对照管应根据供试品特性加入相应对照菌液1ml(抗细菌药物，以金黄色葡萄球菌为对照菌；抗厌氧菌药物，以生孢梭菌为对照菌；抗真菌药物，以白色念珠菌为对照菌)。阳性对照管细菌应在培养24～48小时，真菌应在培养24～72小时有菌生长。结果判断当阳性对照管显浑浊并确有细菌生长，阴性对照管呈阴性时，可根据观察所得的结果判定。
结果判断 如需气菌、厌气菌及真菌培养基管均为澄清或虽显浑浊但经证明并非有菌生长,均应判为供试品合格；如需气菌、厌气菌及真菌培养基管中任何1管显浑浊并确证为有菌生长，应重新取2倍量供试品，分别依法复试，除阳性对照管外，其他各管均不得有菌生长，否则应判为供试品不合格。
讨论 目前，抗生素类药物的应用非常广泛，针对每种抗生素类药物建立严格的质量标准，提高抗生素的质量就显得尤为关键。所以对一个新品种建立无菌检查法时，对其方法进行验证就显得尤为必要。薄膜过滤法作为无菌检查中的一种方法，具有准确、方便、快捷的优点，是无菌检查时所采用的一种重要方法。试验表明上述方法操作方便快捷、结果准确。所以，该无菌检查方法验证对保证结果的可信度和准确性具有重要意义。
无菌灌装设备的检验方法
最佳答案产品达到A级或B级商业无菌要求
按《液体食品包装设备验收规范》（征求意见稿）检验方法如下：
（1）菌落总数测定按GB4789．2规定进行。
（2）大肠菌群测定按GB4789．3规定进行。
（3）沙门氏菌检验按GB4789．4规定进行。
（4）志贺氏菌检验按GB4789．5规定进行。
（5）金黄色葡萄球菌检验按GB4789．10规定进行。
（6）溶血性链球菌检验按GB4789．11规定进行。
（7）霉菌和酵母计数按GB4789．15规定进行。
（8）无菌A级、无菌B级和热灌装设备所包装的液体食品的微生物增殖检验。
a．将全部样品在36±1℃条件下保温7天；
b．目视检出涨包（袋，瓶）、泄露的单位样品，记录数量；
c．打开其余全部样品进行pH值测定和感官检查，检出pH值与多数样品的正常值相差0．2和感官检查有疑点（浑浊、沉淀、色泽变化、嗅觉或味觉变化等）的样品，进行涂片染色镜检。用革兰氏染色法染色、镜检，至少观察5个视野，判断是否有微生物增殖现象。将有微生物增殖的样品记录数量；
d．将b和c记录的数量相加得出微生物增殖指标不合格样品的总数。
（9）游离性余氯检验按GB5750中37．1节的规定进行。
（10）H2O2的残留量检验按GB14891．9附录A中规定进行。
设备具有较好的适应性
（1）灌装容量范围宽
当前国内外较好设备的灌装容量为120~550ml/袋。
（2）对包材的适用性强
较好的设备能够适应较宽范围的包材，这样可使用户对包材有较多的选择余地。
自动控制系统
设备能够自动完成包装材料的输送、成型、封口动作，拥有较宽的灌装范围，并达到较高的包装。
当前国内外较好设备的生产能力为6000~7000袋/小时。
独立的自动CIP装置
用于生产前后的碱溶液、酸溶液、无菌水的清洗以及高温蒸汽的杀菌。
系统的故障报警与保护
为保证灌装机生产出合格的产品，系统应有合适的报警系统，以确保系统发生故障时能够及时发出报警信号，并做出相应的联动保护，如：停止灌装、停机等。
较低的能源消耗
电、压缩空气、蒸汽、水等能源的消耗量应较小，以降低用户的使用成本。
破漏袋率较低
设备达到万分之一左右的破漏袋率是性能比较好的。如果破漏袋率低于千分之一，则该设备应视为不合格。
无菌室验证时应验证参考什么标准
最佳答案GB/T 18204.1-2000公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定
无菌室是进行细菌、霉菌等定性、定量的实验场所。墙壁、地面、天花板和桌面要求表面光 滑、易于清洗, 液体不易渗漏, 并能抗实验室常用的各种消毒剂的腐蚀。无菌室要求完全封 以防外部污浊气体和混虫进入室内,与外界应有传递物品的小窗, 有空气消毒的设备, 室内仅进行无菌的操作。定期用乳酸熏蒸, 应有专用鞋、衣帽、口罩, 每次用后消毒等 我国目前尚无卫生微生物无菌室设计规范,对无菌室的洁净度和空气沉降菌落数无明确要 求。
空气中绝大多数细菌, 直径015~5μ 成一定粒径的生物性粒子而悬浮,直接影响无菌室空气环境,因此选用015 尘埃粒子作为空气洁净度指标 。根据《医药工业洁净厂设计规范》中的中国医药工业洁净厂房空气 洁净等级, 世界卫生组织(WTO) 推荐医院无菌室的标准200cfu/ m3 和日本的5 min 2cfu/皿,我们将无菌室洁净度设计成万级和千级两个等级, 尘埃数,350000 30min 沉降菌落数3cfu/ 沉降菌落数2cfu/ 传统无菌室的不足当前的卫生微生物无菌操作实验室存在设计缺乏整体安排、用材不合理、易受污染、洁净度 低、工作环境差等诸多不足。无菌室采用磁砖、乳胶漆、涂料等作墙面, 易生霉、积尘、剥 落且不易清洁, 无菌室由于完全密闭, 空气不能进行置换, 工作人员在操作时, 因工作量 大、工作时间长, 使得工作环境较为恶劣。
无菌室空气洁净度低, 使细菌、霉菌等的定性、 定量实验受影响, 尤其被霉菌污染后, 实验室不易进行消毒处理。 无菌操作实验室设计探讨 无菌室布局 实验室整个布局设计按照清污分流、人流分流的原则, 避免交叉污染。无菌室 设计出清洁通道二条: 一条是人流通道, 为实验人员进出和少量物品进入通道; 另一条是物 流通道, 运送实验用品。一条污染通道, 运送实验完成后的废物。物流通道为洁净度十万级 人流通道为十万级缓冲间、更衣室。无菌室用材 无菌室的隔断及吊顶采用新型建材彩钢夹芯板。该材料防火、隔音、隔热、耐 腐蚀、耐水蒸气渗透、易清洁, 彻底解决普通无菌室用磁砖、乳胶漆、涂料等作墙面,易生 霉、积尘、剥落、不易清洁等问题。无菌室的地面采用环氧树脂自流平, 耐腐蚀、耐磨、易 清洁。
无菌室净化整个无菌室采用先进的层流净化系统, 能保证实验室恒温、恒湿、新风量和洁 净度要求。该系统通过粗、中、高效3 种不同孔径的过滤膜, 对空气中不同粒径的尘埃粒子 (大于015μ 进行过滤,让尘埃粒子不能进入实验室, 从而使附着在尘埃粒子上的微生物, 包括细菌、霉菌等不能污染实验室; 采用从顶部送风、下侧回风的气流组织方式,既能保证 洁净度, 又能节约能源; 高低洁净度级别的房间维持一定正压差, 防止洁净度低的空间污 染洁净度高的空间; 安装紫外光灯; 工作时, 风淋室吹去附着在工作服及样品外包装上的 部分尘埃, 传递窗传递干净的实验用品, 这些设计能达到无菌室的洁净要求。同时, 新风量 按照40 m3/ 设计,新风量能满足人员的需要, 彻底解决传统无菌室不能置换新鲜洁 净空气、工作环境差等问题[ 无菌室质量控制措施按照GMP 规范, 进入无菌室的工作人员严格执行自身净化程序, 鞋、更衣、戴口罩等;无菌室以及室内的材料、工具、仪器设备使用前用紫外线照射30 min 每次实验完成后,做好桌面、设备表面、地面的清洁卫生; 工作有、 鞋帽、口罩定期清洗、更换, 在洁净环境下烘干或晾干; 每次实验后用空气平板沉降法对无 菌室内空气沉降菌落数进行调查, 平皿直径9 cm 沉降时间30min 如果3 cfu/ 则用乳酸熏蒸, 并检查设备运行情况。
青霉素钠无菌检查的方法验证
最佳答案青霉素钠无菌检查的方法验证
目的 建立健全注射用青霉素钠无菌检查方法，保证检验结果的准确性和可靠性。方法 按中国药典2010年版二部(附录XI H)无菌检查法中的薄膜过滤法进行。
1 试验环境与材料
1．1 试验环境在环境洁净度万级、局部洁净度百级的单向流空气的菌无室中进行。
1．2 仪器智能集菌仪(杭州泰林生物技术设备有限公司)、PY330一次性全封闭集菌培养器(杭州泰林生物技术设备有限公司)、生化培养箱(苏州威尔实验用品有限公司)、霉菌培养箱(苏州威尔实验用品有限公司)、生物安全柜(苏州安泰空气技术公司)
1．3 试药注射用青霉素钠
1．4 试验用菌株金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26 003l、大肠埃希菌[CMCC(B)44 102]、枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501]、生孢梭茵[CMCC(B)64 941]、白色念珠菌[CMCC(F)98 001]、黑曲霉[CMCC(V)98 003]。
1．5 培养基、稀释液及缓冲液1．5．1 干粉培养基 硫乙醇酸盐流体培养基、改良马丁培养基、营养琼脂培养基、琼脂粉。
1．5．2 细菌稀释液0．9％ 灭菌氯化钠溶液。
1．5．3 冲洗用缓冲液pH7．0氯化钠-蛋白胨缓冲液。
2 方法与结果
2．1 菌液制备按中国药典2010年版附录ⅪH无菌检查法菌液制备法制备 。
2．2 菌落计数取金黄色葡萄球菌菌液、大肠埃希菌菌液、枯草芽孢杆菌菌液各1 m1分别接种于营养琼脂培养基中，生孢梭菌接种至含1．5％琼脂的硫乙醇酸盐流体培养基中，30~C～35'E生化培养箱培养24～48 h，取白色念珠菌菌液、黑曲霉菌液各1 m1分别接种至改良马丁琼脂培养基中，经23℃ 一28~C霉菌培养箱培养48～72 h，计数。(上述各菌液分别接种两个平板，取平均值，同时设阴性对照)
2．2 方法学验证
2．3．1 试验组(样品+阳性) 取一次性全封闭集菌培养器(三联装)一套，先用少量pH7．0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液润湿滤膜，取样品15瓶溶解于250 ml缓冲液中，按薄膜过滤法过滤，样品过滤完毕后，再用pH7．0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗，每次每管注人冲洗液100 ml，充分振摇，完全排空后循环操作5次，总冲洗量达到500 ml每管。冲洗完毕后在2管中分别注人改良马丁培养基100 ml，另1管中注入硫乙醇酸盐流体培养基100 ml。另取一套集菌培养器(三联装)取本品依上述方法过滤并冲洗后，均注入硫乙醇酸盐流体培养基100 ml，将上述6管集菌培养器移至阳性对照室，于含硫乙醇酸盐流体培养基的集菌培养器中，分别接种金黄色葡萄球菌菌液、大肠埃希菌茵液、枯草芽孢杆菌菌液、生孢梭菌菌液各1 ml，于含改良马丁培养基的集茵培养器中，分别接种白色念珠菌菌液和黑曲霉菌液各1 ml，按前述规定温度培养3～5 d，观察结果。
2．3．2 阳性对照组取一次性全封闭集菌培养器(三联装)二套，4管中分别注入硫乙醇酸盐流体培养基各100 ml、2管中分别注入改良马丁培养基各100 ml，在阳性对照室内将6种菌液分别接种至相应管内，作为阳性对照，按前述规定温度培养3～5 d，观察结果。
2．3．3 阴性对照组取一次性全封闭集菌培养器(二联装)一套，滤过适量缓冲液后分别注入硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基各100 ml，作为阴性对照，按前述规定温度培养14 d，观察结果。
2．3．4 样品的无菌检查 取样品15支依上述方法同法操作，以500 ml／管的冲洗量冲洗，加入培养基后，按规定温度培养14 d，逐日观察，若培养14 d均澄清；由此判定供试品符合规定。
结果判断 与对照管比较，如含供试品各容器中的试验菌均生长良好，则说明供试品的该检验量在该检验条件下无抑菌作用或其抑菌作用可以忽略不计，照此检查方法和检查条件进行供试品的无菌检查。 如含供试品的任一容器中的试验菌生长微弱、缓慢或不生长，则说明供试品的该检验量在该检验条件下有抑菌作用，可采用增加冲洗量、增加培养基的用量、使用中和剂或灭活剂、更换滤膜品种等方法，消除供试品的抑菌作用，并重新进行方法验证试验。
讨论 目前，抗生素类药物的应用非常广泛，针对每种抗生素类药物建立严格的质量标准，提高抗生素的质量就显得尤为关键。所以对一个新品种建立无菌检查法时，对其方法进行验证就显得尤为必要。薄膜过滤法作为无菌检查中的一种方法，具有准确、方便、快捷的优点，是无菌检查时所采用的一种重要方法。试验表明上述方法操作方便快捷、结果准确。所以，该无菌检查方法验证对保证结果的可信度和准确性具有重要意义。
无论你的行为是对是错，你都需要一个准则，一个你的行为应该遵循的准则，并根据实际情况不断改善你的行为举止。了解完无菌方法学验证:医疗机具无菌检查方法，若米知识相信你明白很多要点。
