今天若米知识就给我们广大朋友来聊聊泡子分离方法,以下关于观点希望能帮助到您找到想要的答案。
如何从自然界分离得到酵母菌，并准备实验样品
答1 食用菌母种的分离,可分为孢子分离法、组织分离法以及基内菌丝分离等 2 孢子分离法,是用食用菌的有性孢子或无性孢子萌发成菌丝,培养成菌种的方法.这种菌种生活力较强,但孢子个体之间有差异,且自然分化现象较严重,变异大,需经出菇试验才能在生产上应用. （l）单孢分离法：是每次或每支试管只取一个担孢子, 让它萌发成菌丝体来获得纯菌种的方法.蘑菇和草菇用单孢分离得到的菌丝,有结实能力,可采用此法分离生产纯菌种.单孢分离生产上较少采用,而且技术复杂,一般采用多孢分离法. 孢子分离法,是用食用菌的有性孢子或无性孢子萌发成菌丝,培养成菌种的方法.这种菌种生活力较强,但孢子个体之间有差异,且自然分化现象较严重,变异大,需经出菇试验才能在生产上应用. （l）单孢分离法：是每次或每支试管只取一个担孢子, 让它萌发成菌丝体来获得纯菌种的方法.蘑菇和草菇用单孢分离得到的菌丝,有结实能力,可采用此法分离生产纯菌种.单孢分离生产上较少采用,而且技术复杂,一般采用多孢分离法. （2）多孢分离法：就是把许多孢子接种在同一培养基上,让它们萌发、自由交配来获得食用菌纯菌种的一种方法.具体操作方法,有以下几种：①种菇孢子弹射法：选择个体健壮、朵形圆正,无病虫害、出菇均匀、高产稳产,适应性强的八九分成熟的种菇,切去大部分,菌柄用无菌水冲洗数遍后再用已灭菌的纱布或脱脂棉、滤纸吸干表面水分.在接种箱或无菌室内,把种菇的菌褶朝下用铁丝倒挂在玻璃漏斗下面,漏斗倒盖在培养皿上面；上端小孔用棉花塞住.培养皿放在一个铺有纱布的搪瓷盘上,静置12～20小时,菌褶上的孢子就会散落在培养皿内.形成一层粉末状孢子印（平菇极淡紫色,蘑菇、草菇 为褐色,香菇、金针菇孢子印白色）.用接种针沾取少量孢子在试管中的琼脂外面或培养皿上划线接种.待孢子萌发,生成菌落时,选孢子萌发早、长势好的菌落进行试管培养. 还可用孢子采集器收集孢子.方法是选好种菇后,按上述程序,轻轻掀开玻璃钟罩,将种菇柄朝下插在孢子采收器的钢丝架上,放在培养皿正中央.随即盖好玻璃罩,用纱布将钟掌周围塞好.并在纱布上倒少许升汞或无菌水.移入 20℃左右恒温箱培养.
野生蘑菇怎么分离孢子
答用蘑菇采集孢子，要买下面已开花的，而且没有洗的。不能用下面还没有开花（即蘑菇下面还包住，还看不到那一愣一愣的条纹状），也就是说孢子全包在里面，就采集不了。把平菇或香菇下面的茎剪掉，平放在深色的纸上，并使平菇或香菇的正面朝上（颜色深的面），浅的面（有一愣一愣条纹）的朝纸（这里面含孢子），然后用透明的玻璃杯罩住（在外面可以观察），以免散落的孢子被风吹散。大概过一天，可以采集到孢子。 因为孢子印是白色的。颜色浅的纸是看不到的。
稍微复杂的方法：表面用70%的酒精擦洗干净或浸入0.1%的升汞水中1~2min，无菌水冲洗数遍后，用滤纸吸干表面水分。在接种箱或无菌室内按无菌操作规程将“种茹”的菌褶朝下，用铁丝支撑置于培养皿上，放在消毒擦洗过和大型钟罩下，把灭菌过的滤纸置于培养皿容器内。整个装置要让之通气，否则罩内湿度过大，孢子反而不易落下。经过12~20h，就可以看到在培养皿内或滤纸上散落一层白色的孢子印。
如果要种植，需要将成熟的蘑菇子实体采回来，制备培养基，然后将子实体挂在乳钟罩内，乳钟罩下面放置培养皿。这样放置以后。用不了多久，蘑菇的孢子就可弹射出来。落在培养皿上，这样就收集了蘑菇孢子了。一朵蘑菇所产生的孢子约有15～16亿个。
自然界里，蘑菇成熟后，会把把孢子撒到腐殖质之中（比如秸秆磨，锯末，烂树叶等）保持适当的湿度和温度，不见光。一定天数后就会生出蘑菇来。
单菌种的分离是消除污染杂菌的一种方法吗
答在自然界里,食用菌都不是单独存在的,而是和许多细菌、放射菌、霉菌等生活在一起的.所谓菌种分离,就是把这些和食用菌一起生活的杂菌分离出来,通过培养,获得纯的优良菌种.菌种分母种、原种、栽培种. (一）母种的分离培养 食用菌母种的分离,可分为孢子分离法、组织分离法以及基内菌丝分离等. 1.孢子分离法 孢子分离法,是用食用菌的有性孢子或无性孢子萌发成菌丝,培养成菌种的方法.这种菌种生活力较强,但孢子个体之间有差异,且自然分化现象较严重,变异大,需经出菇试验才能在生产上应用. （l）单孢分离法：是每次或每支试管只取一个担孢子, 让它萌发成菌丝体来获得纯菌种的方法.蘑菇和草菇用单孢分离得到的菌丝,有结实能力,可采用此法分离生产纯菌种.单孢分离生产上较少采用,而且技术复杂,一般采用多孢分离法. （2）多孢分离法：就是把许多孢子接种在同一培养基上,让它们萌发、自由交配来获得食用菌纯菌种的一种方法.具体操作方法,有以下几种： ①种菇孢子弹射法：选择个体健壮、朵形圆正,无病虫害、出菇均匀、高产稳产,适应性强的八九分成熟的种菇,切去大部分,菌柄用无菌水冲洗数遍后再用已灭菌的纱布或脱脂棉、滤纸吸干表面水分.在接种箱或无菌室内,把种菇的菌褶朝下用铁丝倒挂在玻璃漏斗下面,漏斗倒盖在培养皿上面；上端小孔用棉花塞住.培养皿放在一个铺有纱布的搪瓷盘上,静置12～20小时,菌褶上的孢子就会散落在培养皿内.形成一层粉末状孢子印（平菇极淡紫色,蘑菇、草菇 为褐色,香菇、金针菇孢子印白色）.用接种针沾取少量孢子在试管中的琼脂外面或培养皿上划线接种.待孢子萌发,生成菌落时,选孢子萌发早、长势好的菌落进行试管培养. 还可用孢子采集器收集孢子.方法是选好种菇后,按上述程序,轻轻掀开玻璃钟罩,将种菇柄朝下插在孢子采收器的钢丝架上,放在培养皿正中央.随即盖好玻璃罩,用纱布将钟掌周围塞好.并在纱布上倒少许升汞或无菌水.移入 20℃左右恒温箱培养. ②褶上涂抹法：按无菌操作分离时；应选择成熟的种菇,用接种针直接插入褶片之间,轻轻抹取褶片表面子实体尚未弹射的孢子,再在培养基上划线接种. ③钩悬法：取成熟菌盖的几片菌褶或一小块耳片（黑木耳、毛木耳、白木耳〕,用无菌不锈钢丝（或铁丝、棉线等其他悬挂材料）悬挂于三角瓶内的培养基的上方,勿使接触到培养基或四周瓶壁.置适宜温度下培养、转接即可. ④贴附法：按无菌操作将成熟的菌褶或耳片取一小块, 用溶化的琼脂培养基或阿拉伯胶、浆糊等贴附在配管斜面培养基正上方的试管壁上.经6～12小时的培养,待孢子落在斜面上,立即把孢子连同部分琼脂培养基移植到新的试管中培养即可. 孢子分离得到的母种、必须进一步提纯复壮,当母种定植一星期左右,菌丝布满斜面时,选择菌丝健壮、生长旺盛无老化、无感染杂茵的母种试管,进而转管扩大,一般到栽培种,转管不宜超过5次. 孢子分离得到的母种,必须通过出菇试验,鉴定为优质菌种后,才可供生产使用. 一般菌类如蘑菇、平菇、凤尾菇、香菇、冬菇和草菇等,都可用多孢分离法获得母种. 现就银耳孢子分离略述于下： 按无菌操作获取种耳后,悬挂种耳的三角瓶经12小时培养后,瓶底培养基表面就有"孢子印".取出种耳,置 20℃—25℃温箱培养2～3天,培养基表面会出现乳白色透明的糊状小菌落,就是银耳的酵母状分生孢子形成的少量银耳菌丝.此时移接入试管斜面培养基上,待长满斜面后,再移接入营养丰富,且表面比较干燥的培养基上.经30天左右,菌落长出白色菌丝. 银耳的酵母状分生孢子、菌丝只有与羽毛状菌丝的子囊菌（香灰菌丝）混合培养时,由后者帮助分解木材及其他一些纤维物质,提供营养,才能利于银耳孢子萌发,菌丝的定植和子实体的形成. 在两种菌丝交会时,先选出两种纯菌丝. 羽毛状菌丝要纯化选育,一般要选取生长迅速,爬壁力强的试管斜面或种瓶,取先端菌丝,转管移接,置25℃—28℃上培养,重复转管几次即可得到优良纯种. 银耳菌丝的特点,菌丝生长缓慢,担孢子也不易萌发.在进行两菌混合时,先取经8～IO天培养的银耳菌丝斜面,按无菌操作方法在该斜面上距银耳菌丝约0.5厘米处接入一 小块羽毛状菌丝.置25℃下培养1周即得到混合好的银耳母种. 2．组织分离培养法 利用子实体内部组织,进行无性繁殖而获得母种的简便方法,即组织分离.该法操作简便,菌丝生长发育快,品种特性易保存下来,特别是杂交育种后,优良菌株用组织分离法能使遗传特性稳定下来.常采用以下分离方法. （l）子实体分离：种菇要选朵大盖厚,柄短,八九分成熟的优良品种.切去菇两基部,在无菌箱内以0.1％的升汞水浸几分钟,再用无菌水冲洗并揩干或用75％酒精棉球擦拭菌盖与菌柄2次,进行表面消毒.接种时,只要将种菇撕开,在萌盖和菌柄交界处或菌褶处,挑取一小块组织；移接 到PDA培养基上.置25℃左右温度下培养3-5天,就可以看到组织上产生白色绒毛状菌丝,转管扩大即得到菌种.如香菇、平菇等可以用此方法. （2）菌核分离：茯苓、猪苓、雷丸等菌的子实体不易采集.而常见的是它贮藏营养的菌核.用菌核分离,同样可以获得菌种.方法是将菌核表面洗净,用酒精或升汞消毒后,切开菌核,取中间组织一小块,约黄豆大小,接种在PDA 培养基斜面上,保温培养.应注意的是,菌核是贮藏器官,大部分是多糖类物质,只含有少量的菌丝,因此挑取的组织块要大一些,如果组织块过小,则不易分出菌种. （3）菌素分离：有一部分子实体不易找到,也没有菌核,可以用菌素进行分离.如蜜环菌、假蜜环菌.其操作方法是先用酒精或升汞将菌素表面黑色皮层轻轻擦拭2～3次, 然后去掉黑色外皮层（菌鞘）,抽出白色菌髓部分；用无菌剪刀将菌髓剪一小段,接种在培养基上,保温培养,即得该菌菌种. 菌素分离要注意：因菌素比较细小,分离素也比较细小,分离时极易污染杂菌,所以要严格操作. 3．基内菌丝分离培养法 利用食用菌生育的基质作为分离材料,来得到纯菌种的一种方法,叫基内菌丝分离法. 此种分离方法是适宜只有在特定的季节才出现,而且是朝生暮死,不易采得的子实体.基内分离法与组织分离法不同之点是,干燥的菇木或耳木中的菌丝常呈休眠状态.接种后有时并不立刻恢复生长.因此,有必要保留较长的时间（约1个月）,以断定菌丝是否能成活.基内菌丝分离法又可分为,材中菌丝分离（即菇木或耳木分离法）及土中菌丝分离法等. （1）材中菌丝分离法：就是菇木或耳木分离法,为了减少杂菌的感染,菇（耳）木在分离之前,必须进行无菌处理.可以把菇（耳）水表面用酒精灯火焰轻轻烧过,以烧死霉菌的孢子,或再用0.1％的升汞水浸孢几分钟,然后用无菌水冲洗后用无菌滤纸吸干.接种块切取时应注意.接种块必须在该菌菌丝分布的范围内切取.所以,菌丝生长缓慢的种类应浅取；菌种生长快的种类可以深取.同时.还应根据菇菌的种类、木材质地、菇（耳）木粗细、发育时间的长短来确定菌丝分布的范围.然后用一把利刀进行切取.接种块应尽量小些,以减少杂菌感染机会,提离菌种的纯度.接种块移到培养基上,就应该放到适合菌丝生长的22℃～26℃ 的温室或温箱中培养,使菌丝恢复生长. （2）土中菌丝分离：食用菌种类很多,许多土生的食用菌；孢子不易萌发.组织分离也不易成功,用土中菌丝分离获得纯种的方法,叫土中菌丝分离. 土中菌丝分离时要注意,由于土中菌丝体的周围生活着多种多样的土壤微生物,因此分离时必须尽可能避开这些微生物的干扰,尽可能批取清洁菌丝素的尖端、不带杂物的菌丝接种,反复用无菌水冲洗,在培养基中加入一些抑制细菌 生长的药物,如 40微克／升的链霉素或金霉素.如发现感染细菌,可以把菌落边缘的菌丝挑出来,接种到木屑培养基中.因细菌没有分解木质素的能力,因此在木屑培养基中不易扩展；只局限于接种处.待菌丝长出感染区后,就可以再进行扩大提纯了. （3）子实体基部分离：从瓶栽、袋栽或大床栽培的子实体基部分离出新菌丝的方法,叫子实体基部分离,现以袋栽银耳为例说明： 从出耳早、出耳率离、无病虫害的栽培室中；选择生活力最强的幼耳5袋,移到气候温和,有散射光的野外场所进行后期培养,以增强菌丝体的生活力.经培养7～10天后,待子实体直径达4～5厘米时便可取回,作为分离的母体.再从中筛选最理想的一朵,用利刀割掉银耳子实体,放置于 0℃的冰箱或有敌敌畏的容器中过夜,以便杀死瓶中的害虫.然后用75％酒精或升汞擦洗耳基和袋子外边的杂质,连同接种工具、接种培养基等移进无菌室.经灭菌后,用接种刀把袋口上部约15毫米厚的老菌根挖除,并进行培养.待袋口露出白色菌丝时,用接种针挑取一块半粒米大的白色菌结体,迅速移入母种试管培养基的中央,轻轻地脱去接种针, 塞上棉塞. 为了能够获得较多的母种,一次接种量要有100—200支试管,以便从中选择.分离后应及时移入22℃—24℃恒温箱或温室中培养.由于培养基内水分较多,菌丝恢复要比耳木分离得快.经2-3天后,分离物的边缘就可看 到白色菌丝.每天要至少观察两次,以便提纯.观察、提纯方法与耳木分离法担同.经适温培养10-15天后,当接种块扭结团出现红、黄色水珠时,即可扩大原种. （二）原种和栽培种的接种培养 母种获得以后,为了满足菌种生产的需要.应选出优良、纯度高的母种进一步扩大为原种. 原种培养基一般采用棉籽壳、木屑、草类等培养基. 瓶装或袋装的原种培养基灭菌后,可送入灭过菌的接种箱内,待瓶中的培养基冷至30℃以下,可按照无菌操作程序进行接种. 菌种瓶（袋）放入培养室时,要经常进行检查,一经发现杂菌污染,立即取出.培养成的原种,菌丝体必须健壮有力,紧贴瓶壁而不干缩,颜色纯正,具有一定清香味,生活力强,扩制成栽培种时吃料快. 栽培种就是将原种进一步扩大培养成三级种,它和原种的接种及培养相同.一般香菇、平菇、冬菇、猴头、木耳、银耳的栽培种多用锯木、棉皮作培养基.蘑菇多用粪草做培养料. 栽培种要求料块不脱水干缩.菌丝体健壮有力、颜色纯正,有清香味,无老化现象,无杂菌污染,有的种许可有少量原基,接入栽培料后,发菌快,长势好,生活力强. 原种在接栽培种时,原种瓶口的一层菌丝体应挖去不用. （三）液体种的简单培养 目前,用液体深层发酵法生产菌种,具有生产量大、周期短、菌龄整齐、成本低廉、接种方便等特点,是实现食用菌工厂化生产的目标.现将液体种培育过程简述于后,供参考. 简言之就是将纯正优良的菌种,接入液体培养基（固体培养基不加凝固剂）,使菌丝繁殖形成大量小菌球,然后将这种培养基拌入木屑或棉籽皮料内,制成菌块、培养其形成子实体.还可用于制原种、栽培种. 培养液体菌种,可将培养液装入三角瓶中,约占空瓶的五分之一重量.用摇瓶机（也称摇床）来培养.摇瓶机有旋转式和往复式两种,一般多用往复式.液体培养基可用马铃薯汁（加糖）,麦芽汁配制,也可用玉米粉、豆饼粉、糖、无机盐等配制.可以混合培养基,因适用于多种食用菌和药用菌的培养,均有好效果.组分：豆饼粉2％,玉米粉1％, 葡萄糖3％,酵母粉0.5％,磷酸二氢钾0.1％,碳酸钙 0.2％, pH自然, 12℃灭菌半小时.然后接种培养. 如果生产量较大,在三角瓶的基础上,再逐级扩大种子缸,发酵罐中进行液体深层通气发酵,产生大量菌种.但由于生产中要求设备繁多,技术性强,我们还应创造条件；实现食用菌栽培的现代化. （四）菌种质量的鉴定 菌种质量鉴定最好的方法是,做出菇试验.但是时间比较长.在购置菌种时,或在菌种生产中,如何能知菌丝生长情况,快速判断菌种质量我们介绍几种方法： 1.肉眼观察：优良菌种菌丝浓白,绒状,粗壮密集,生长整齐,快,香味浓厚. 2.优良菌种标准可归纳为："纯、香、正、壮、润"五个字.检查时,打开瓶塞,从菌种瓶中部取出小块菌丝体,观察色泽,闻其气味,手捏料块检查其含水量,看是否符合上述要求标准. 3.显微镜检查：挑取少量菌丝,置显微镜上观察其形态,菌丝分枝,分隔情况,锁状联合,细胞膜的厚薄. 培养观察：从菌种瓶中挑取小块菌丝体,接种斜面试管培养基上,置23℃～25℃恒温中培养,经五周后检查菌种生活力.如果菌丝生长快,旺盛纯一,健壮浓厚,长且整齐,则表示菌种的生活力强. 4.分块法：在桌上放一张白纸,把菌龄相同的菌种从瓶内取出一大块,用手分成2块,再把2块分成4块,4块 分成8块,依次进行.优良菌种整块多,碎渣少.劣次菌整块少,碎渣多. 5.液体菌种鉴别：当三角瓶或发酵缸培养3-7天后,如液面出现气泡,产生"油皮"、混浊等现象,说明菌种本 身带有杂菌.如菌块上浮,或迟迟长出很薄的菌丝层,则说明菌种生活力弱.白块四周的菌丝生长快、浓白、棉絮状,表明菌种生命力强. （五）菌种生产过程中的杂茵防治 在生产菌种时,要时刻注意杂菌污染,以防为主,一旦发生,根治很不容易.所以整个制种过程都必须在无菌条件下进行.接种箱及所有分离、接种的用具、器皿,都要进行严格的消毒灭菌.工作人员的双手要用消毒剂清洗,并穿戴消过毒的工作服、帽和口罩,动作要敏捷、准确,尽量不要讲话走动,以防空气中的杂菌感染. 分离母种时,选择出菇早、生活力强,第一潮菇是关键,因它生活力强,接种后迅速占领阵地,无杂菌侵入的机会. 被污染的菌种,原因是多方面的,一般是灭菌不彻底所致,或因接种时无菌操作不严、瓶盖不合适造成的.所以灭菌一定要彻底,最好在接种萌将培养基置25℃左右温箱中做效果检查,经2天不长杂菌,说明彻底,可以使用,接种过程中一定要严格无菌操作. 污染杂菌另一个原因可能是分离母种时感染杂菌,因种菇表面带菌,消毒不彻底,通过组织块将杂菌带入培养基. 总之,污染机会很多,要注意环境消毒,按无菌操作规程彻底灭菌,层层把关,环环抓紧,严加注意；提离菌种质量.
什么是孢子分离法？怎样进行？
答所谓的孢子分离法是把成熟的有性孢子接种在同一培养基上，让其萌发、自由交配来获得纯菌种的方法。孢子分离法因所利用孢子的数目不同，又分为多孢子分离和单孢子分离两种。一般来说，多孢子分离所获得的纯种基本上能形成子实体，且方法易学，分离较易成功，在生产上经常采用，不过应作出菇实验后才能用于生产。单孢子分离一般用于培育优良新品种，且操作比较复杂，必须要有熟练的技术和设备方可进行。因此，在制种时一般采用多孢分离法，其操作方法如下：
（1）种菇挑选种菇即分离材料，对种菇进行挑选是菌种分离中的重要环节，必须从高产、稳产、适应性强的优良品系群中，严格挑选出菇形、商品性好，外表清洁、无病虫害七八分成熟的子实体做种菇。采摘后放入灭过菌的纸袋内，带回接种室。（2）器皿消毒首先应将所用的分离器皿（烧杯、玻璃罩或三角瓶、培养皿、剪刀、接种针、镊子、解剖刀、不锈钢钩、纱布）一起置于高压灭菌锅内进行消毒灭菌，并准备好无菌水。然后连同酒精灯、消毒药品、制作备好的三角瓶或试管培养基和分离器皿，以及经处理的种菇等，放入接种箱（室）内。用紫外线灯照射45分钟或用气雾消毒剂熏蒸30分钟或同接种箱使用灭菌，才可按无菌操作进行分离。（3）无菌处理在接种箱（室）内，用镊子夹住种菇，放入70%酒精液或0.1%升汞溶液内浸3～5分钟，以杀死种菇表层的杂菌。捞取后用无菌纱布吸干，置于消毒后的培养皿中备用。（4）孢子采集将经无菌处理的种菇切取一部分或不切取，用不锈钢钩钩住，挂入三角瓶的正中，距离培养基表面2～3厘米，并塞好棉塞，静置24小时。之后会发现有大量的孢子弹落于培养基上，形成一层孢子印。（5）接种培养在接种箱内，用接种针挑取少量的孢子，放入装无菌水的三角瓶中，摇动制成孢子悬浮液。再用接种针蘸取一滴孢子悬浮液，涂布于斜面培养基或在培养皿的平板上画线接种。然后适温培养，待孢子萌发成菌落时，筛选萌发早、生长快的菌丝进行转管培养。当白色菌丝长满整个试管培养基斜面，即得原始母种。
杨树菇菌种分离的方法有哪些？
答杨树菇和大多数木生型菇菌一样，其纯菌种可用孢子分离法、组织分离法或菇木分离法获得。通常以交叉使用前两种分离方法为主。前面已经说过，我国杨树菇的单孢子菌株具有结实能力，因此在进行孢子分离时，可采用单孢分离法获得纯菌种，经过出菇鉴定后，挑选优良菌株作母种使用。或在生产上使用的优良菌株中，选取生长健壮、形态正常、无病虫害的幼嫩子实体作为分离材料，按照组织分离的无菌操作程序分离接种。以下简要介绍单孢分离法和出菇鉴定要求。
1.单孢分离法
（1）单孢稀释分离法 将选择好的种菇置于孢子弹射分离装置内进行孢子弹射，收集孢子（弹射分离方法见黄伞有关部分）。然后对收集的孢子用无菌水进行稀释分离。将稀释后的孢子悬浮液滴在载玻片上，放在低倍镜下进行检查，至每滴中有4～5个孢子为合适。接种时，用注射器吸取孢子悬浮液，将试管棉塞拔松，沿试管壁插入注射器针头，每支试管注入1～2滴孢子悬浮液，转动试管，使孢子均匀地分布在培养基表面，静置1～2小时后，移入温箱培养。
也可将已稀释的孢子悬浮液注入培养皿内，每个培养皿加1～2滴即可，然后倒入已溶化并冷却到45℃的琼脂培养基，厚0.5厘米，在工作台上左右旋转混匀，静置1～2小时，倒转培养。孢子萌发后，将单孢菌落连同少许培养基移接到试管内培养。
（2）单孢定位切割分离法 浙江省农业科学院园艺研究所范雷法等（1996）曾介绍一种自制简易定位切割器，能快速、准确的分离单孢菌落。定位切割器制作方法如下：选用普通圆珠笔芯塑料空管一小段，长2～3厘米，用刀片将空管一端削成薄片，另一端用火熔化压成平头，用一只乳胶指套，在其中间打一孔，插上上述做好的塑料平头，将其固定在40或100倍显微镜的镜头上，使其紧密接触。
切割器的尖头部分，要削得薄、长而光滑，使之能切割完好，为粘连切割圈外的培养基；切割器与物镜固定要紧，且位置在正中，使物镜与笔芯空管处于同一轴心上。做成之后用以下方法进行校正：在载玻片或培养皿上倒入一薄层（厚2～3毫米）水样琼脂培养基，凝固后，用带有定位器的物镜镜头，轻轻转动上下调节器，使定位切割器下降，并切割到培养基的2/3处，勿切割到底，以免损坏定位器和琼脂培养基的表面；再转动调节器，使定位切割器上升，用低倍镜观察定位切割器切割后的培养基块是否在视野正中，如果不在正中，则应对乳胶指套的相对位置进行调节，至适合要求。如显微镜是以载物台作为上下调节的，也可用同样方法校正。一般普通笔芯内径在2毫米左右，约是低倍镜的2倍左右视野。定位切割器使用前浸泡在酒精内消毒备用。
按常规方法将孢子稀释后制成PDA琼脂平板，在低倍镜下检查，若确认为单孢，则可改用定位切割器进行切割，按上述方法在同一培养皿内将单孢切割完毕。再将金属针打扁，使尖端平而稍弯曲，用来在培养皿内挑取切割块，要尽量避免碰到圈外培养基，然后移置在斜面上培养。
（3）试管稀释点样法 用灭菌接种针在培养皿内蘸取少量担孢子，或用接种针直接从菌褶上轻轻刮取少量孢子，洗入试管内的无菌水中，充分摇动，使之均匀分散。然后用灭菌接种针蘸取1滴孢子液，放在载玻片上，用低倍镜检查，如果每滴水中仍有3～4个孢子，应继续稀释，至每滴中含1～2个孢子为止。将水滴滴在培养皿盖的边缘2厘米处，再用低倍镜检查，将只有1个担孢子的水滴用蜡笔在反面作标记，并加1滴营养液。为防止培养液过快蒸发，在培养皿内加少许无菌水，用纸包好进行培养。第二天，孢子萌发，经镜检，确认为只有1个芽管，可以在水滴上加一小片琼脂块，以便孢子萌发后继续生长。2～4天后，将菌丝连同琼脂块移到试管内培养。
（4）毛细管切割法 将不同稀释度的孢子悬浮液滴入培养皿的琼脂平板上，每个培养皿放1～1.5毫升，停留几分钟后，倒去多余的水，进行保温培养。孢子发芽后，在低倍镜下用毛细管割取只有1个芽管的单孢子，移接到琼脂斜面上培养。
2.多孢分离法 按常规方法准备好琼脂平板培养基，用灭菌纱布或滤纸吸去皿盖反面的冷凝水。从杨树菇子实体上剪下一小块菌盖，菌盖下约有6～7片菌褶，再将菌褶的前端和基部剪去，留下的菌褶长约1.5～2厘米，再盖到培养皿上，放到温室培养。6小时后，将培养皿盖按顺时针方向移动若干度（不得小于30度），以后每隔3～4小时按同样方向移动若干度，最后回复到原来位置。然后，移去分离材料，将培养皿放在适温下培养，在平板上会出现不同密度的菌落，挑选分散性较好，且又连接成片的菌落，转入试管内培养。用这种方法，能及时发现混入伞菌孢子内的杂菌。或将一小片菌褶贴附在试管壁上，使孢子直接散落在斜面上。
3.组织分离法 选取肉厚、朵大、无病虫害、六七分成熟的子实体作种菇用，已开始弹射孢子的不可作种菇。将选好的种菇用自来水冲洗数次，再用无菌水冲洗数次，然后用无菌纱布或滤纸吸干水分。在接种箱内按无菌操作方法进行组织分离。用手将种菇盖边轻轻撕开，手指不要接触撕开后露出的菌肉部门。将解剖刀在火焰上烧灼灭菌，待冷却后，在菌盖和菌柄或菌盖与幼嫩菌褶连接处挖取一小块（约绿豆粒大小），接种在斜面上。在切取组织块时，不要挖取接近菌盖边缘的部分，以减少杂菌污染。接种时，将组织块准确地接种在斜面的中央，切勿在斜面上到处移动，这样便于及时鉴别组织块是否有细菌污染，或当污染出现后便于进行纯化分离。接种后，将斜面置于23～25℃下培养，若组织块上有白色菌丝萌发，并向培养基上蔓延，1～2天后，及时用接种针挑取少量带有菌丝的培养基，接种到空白斜面上进行纯化培养，即可获得杨树菇母种。
组织分离时，组织块附近若出现霉菌污染，因霉菌丝与杨树菇菌丝生长相近或更快，故予淘汰。如果组织块附近出现灰白色或黄白色黏状物或水渍样物，则是细菌、酵母菌污染的表现。这时可降低培养温度，抑制污染菌落的生长，当杨树菇菌丝的菌落长到细菌（酵母）菌落之外时，则可采用切割菌落前端的方法进行纯化，也可得到杨树菇的纯培养物。当菌丝长满斜面时，检查培养基的背面，若在杨树菇菌丝的下面出现黄褐色的斑块，则是被菌丝覆盖的细菌（酵母）菌落，可用切割菌丝生长前端的方法再次进行纯化培养，有时这种纯化分离要连续进行多次才能获得纯菌种。这种方法只是一种辅助措施，只有当组织分离的绝大部分斜面都被污染时，才可以采用这种纯化分离法获得母种。
4.出菇鉴定 为了检验所分离单孢子菌株是否具有结实能力，出菇特性以及产量水平，对分离物要进行出菇鉴定。此工作可分别在液体培养基和固体培养基上进行。
（1）液体出菇 鉴于杨树菇易于在液体培养基中生长，出菇试验可采用液体培养。培养液的组成为：玉米粉25克，豆饼粉10克，葡萄糖10克，硫酸镁1克，磷酸二氧钾2克，蒸馏水（或自来水）1000毫升。将上述培养液分装于1000毫升三角瓶中，每瓶装量200～250毫升，按常规进行高压灭菌备用。
接种后于25℃静置培养，约15天左右，在培养液表面陆续开始分化原基，并形成正常子实体。在25℃有散射光条件下，绝大多数单孢菌株在15～20天均能分化原始，但出菇时间的早晚与产量没有正相关性。出菇早虽然是一个良好的生产性状，但在出菇较晚的菌株中，也可发现出菇密度高，菇潮集中，产量高的优良菌株，这些考核要在固体培养基上进行。
采用液体培养进行出菇试验，不但方法简单，便于观察，且便于比较在同一单位时间内，不同菌株间的生物量（将滤取菌丝用水淋洗干净，与子实体分别置于60℃烘干到恒重，用电子天平称量）。另一特点是在短时间内即可达到出菇试验的目的。
（2）袋式栽培 袋栽培养料组成为：阔叶树木屑37%，棉籽壳37%，麦麸20%，玉米粉5%，石膏1%，调含水量为65%。每袋装料300克，于称量后分装于塑料袋中，按常规方法进行高压或常压灭菌备用。
接种后在25℃培养，待菌丝满袋后，将菌袋移至供出菇试验的栽培室内，每个供试菌株一般不得少于20袋，随机排列在床架上，并在同一环境条件下进行栽培管理。待原基分化后，脱去塑料袋，随后进行水分、光照和通风管理。比较其生产性状和产量。
选择原基分化早，菇丛密，菇数多，单菇粗壮，生物学效率高，抗性好的优良菌株用于生产。
如何分离苔藓植物的孢子？
答孢子植物的一种。
苔藓植物可用分株、分芽或孢子播种繁殖，大量生产一般用分株或分芽繁殖法。
分株繁殖长江流域及以南广大地区，大都在5至9月进行。这时，气温高，雨天多，空气湿度大，植株的生理功能非常旺盛，适宜绝大多数藓类生长发育，是分株繁殖的最佳时期。苔藓喜欢在偏酸性土壤上生长，分株繁殖基质，可用黄泥、河沙和腐叶土各等份，充分混合，再经过严格高温消毒。分株繁殖的具体方法是，将分离出的母体多株或成团栽植在基质中，保持高湿环境，大约一周后成活。之后其自身可自然繁殖生长。
分芽繁殖苔藓营养生长和生殖生长期，叶、枝间潜伏着许多不定芽苞。这些不定芽，在吸收母体营养的同时，自身也在不断地进行生理生化活动，发育出不定根，成为一株完整的小植株。如果将其切离母体，进行单独栽植，成活后继续生长，便是一株独立的植株。因此，可在苔藓生长的旺盛季节，挑选生长健壮的不定芽，进行分芽繁殖，便可获得新株。
栽培管理
苔藓的栽培，有以下3种方法：一是穴栽，即五六株栽一穴，间隔一定距离种植在平整的地面上或石缝间；二是片植，即将苔藓一片片铺设在预先平整好的土地上，稍作镇压，适当淋水，使之与土壤紧密相连；三是断茎栽培，即将苔藓切成细段，均匀地散布在平整好的土地上，再覆上一层细土。
栽植后的管理比较简单。一是及时除草。刚栽植的苔藓植物竞争力低，其他高等植物容易侵入，因此刚栽植时除草很重要。当其密被土壤后，杂草就几乎不能侵入了。二是调节湿度。栽植后要采用一些喷灌或喷雾装置适当增加空气湿度，以利于旺盛生长。三是适当增加光照。苔藓虽耐阴，但生长季节也需要一定的光照。夏季气温高，光照强烈，在用遮阳网创造遮阴和凉爽环境时，应在东西面有一些侧射光，以加快其生长。
从上文，大家可以得知关于泡子分离方法的一些信息，相信看完本文的你，已经知道怎么做了，若米知识希望这篇文章对大家有帮助。
